为了督促自己积极读文献qwq，所以把笔记发在这里。今天是Day1，flag是两天一篇，猜猜什么时候会倒（划掉）
这几天打算读读心血管相关，主要是付毅老师和孔炜老师组的文章（小声）
【资料图】
今天看的是付毅组6月20号在cell reports medicine上的文章，标题为Targeting cytokine-like protein FAM3D lowers blood pressure in hypertension，靶向细胞因子样蛋白FAM3D缓解高血压。
放个链接：.
FAM3D是一种具有趋化活性的细胞因子样蛋白，通过其细胞表面受体FPR1和FPR2募集单核细胞和中性粒细胞。付毅老师组之前的研究发现FAM3D在腹主动脉瘤(AAA)发病过程中在内皮细胞(ECs)中显著上调，通过FPR1和FPR2信号，诱导中性粒细胞募集，加重AAA的发生。这篇研究评估的是FAM3D是否参与高血压的发病机制。但是为什么会从腹主动脉瘤想到做高血压？橘猫不明白qwq
Result1: The increase in FAM3D correlates with the pathogenesis of hypertension
先来看第一个结果。作者参考了80例高血压患者与80例健康对照组，测定血浆中FAM3D的水平，之后又使用不同处理得到的高血压小鼠模型测FAM3D，具体的统计方法不在这里赘述，得到的结论是FAM3D在内皮细胞中表达的上调与高血压发病相关。
Result2: FAM3D deficiency ameliorates AngII-induced hypertension and related vascular pathologies
第二部分是个老套路，要验证FAM3D与高血压发病的相关性，于是敲掉了FAM38。
对于野生型、FAM3D缺陷型小鼠，使用无创尾袖法和有创无线电遥感法，比较AngII注射后的舒张压、收缩压、平均动脉压
在输注AngII后，WT小鼠的收缩压、舒张压和MAP逐渐升高，而FAM3D缺乏显著降低了AngII诱导的血压升高。
这是24小时血压遥感监测 ////方法的名字都好高端哇
另外还有一些高血压相关的病变，例如AngII输注显著增加动脉脉搏波速度(PWV)和胸主动脉外胶原沉积，而FAM3D敲除抑制了这些改变。此外，流式细胞分析显示，FAM3D缺失减轻了主动脉壁的白细胞浸润，表明FAM3D诱导血管白细胞募集。以上表明，FAM3D基因敲除可减轻血管炎引起的高血压和相关的血管僵硬和炎症。
Result3: FAM3D impairs endothelium-dependent vasorelaxation to further enhance vasoconstriction
这个部分在研究FAM3D对血管舒张性和收缩性的影响。这里使用了苯肾上腺素作为血管收缩的诱导剂，AngII注射14天之后，敲除组动脉对苯肾上腺素的收缩反应明显减弱。用NO合成酶抑制剂L-NG硝基精氨酸甲酯(L-NAME)预处理动脉，引起内皮功能障碍，结果二者的差异被消除了，表明FAM3D通过影响内皮功能调节血管收缩。
这部分之后还用到了乙酰胆碱和硝普钠.....总之，得到的结论是FAM3D特异性地减弱了内皮依赖性动脉舒张，并进一步加强了血管收缩
Result4: FAM3D causes eNOS uncoupling in ECs in vitro
第四部分就深入到机制方面了。在上一部分里提到了血管舒张，而引起血管舒张的最重要因素就是NO，因此在这里才会把目光靶向eNOS。偶联的eNOS依赖性NO的产生对于内皮依赖性血管舒张至关重要，而eNOS解耦降低NO的生物利用度并损害血管舒张。
FAM3D剂量依赖性地降低了ec中NO的产生和分泌 ////我查了查这个DAF-FM DA染色，是一种检测NO的荧光探针方法
而eNOS解偶联抑制剂BH4显著逆转了FAM3D对ec中NO产生的抑制 ///图太大了排版很难看，但橘猫不会改qwq
而通过WB验证了总eNOS含量并没有改变，仅仅是解偶联形式的eNOS变多了
于是这一部分的结论是FAM3D在体外可诱导eNOS解偶联，成为单体形式，不能够产生NO，导致血管内皮舒张功能障碍。
Result5: FAM3D deficiency reverses eNOS uncoupling to alleviate hypertension in vivo
又到老套路了！开始敲除。
这是NO升高
这是超氧阴离子增多
这是单体eNOS变少
用DAHP消除FAM3D缺陷介导的AngII输注后一氧化氮生物利用度的恢复，FAM3D缺陷的保护作用消失。
这些结果表明FAM3D缺乏通过恢复eNOS偶联来缓解高血压。
Result6: FAM3D leads to eNOS uncoupling through FPR1/2-mediated oxidative stress
很自然地想到，FAM3D为什么会导致eNOS解偶联？
基于之前的研究，FPR1和FPR2介导FAM3D诱导的中性粒细胞聚集，于是使用环孢素H (CsH)和WRW4分别拮抗FPR1和FPR2。两种拮抗剂均显著抑制FAM3D介导的eNOS单体化以及内皮细胞NO生物利用度下降，表明FPR1和FPR2参与了FAM3D诱导的eNOS解偶联和内皮功能障碍。
FAM3D在刺激后15分钟至1小时内增加了细胞内ROS的产生，而CsH和WRW4在FAM3D处理后有效抑制了ECs中ROS的积累。而ROS正是eNOS解偶联的关键。
ROS抑制剂NAC和NADPH氧化酶抑制剂apocynin可以减轻氧化应激，并显著逆转FAM3D诱导的NO水平和eNOS单体化。
这一部分理一理qwq，大概是FAM3D会通过FPR1/2引发氧化应激，产生的ROS引发eNOS解偶联，进而导致NO生成障碍，内皮舒张障碍。
Result 7: Targeting FAM3D ameliorates hypertension
最后一部分，对靶向FAM3D的疗效进行检验。来看看怎么造模的——shRNA敲FAM3D，注射14天AngII
内皮细胞FAM3D敲低逆转eNOS解偶联，eNOS单体化降低，NO生物利用度增加，从而降低小鼠的血压
还用了DOCA盐诱导模型，效果类似。
为了进一步在体内靶向FAM3D，使用了一种FAM3D中和抗体6D7，以阻断FAM3D的功能。大概是一边注射AngII，一边注射6D7。
结果同样是逆转eNOS解偶联，eNOS单体化降低，NO生物利用度增加，从而降低小鼠的血压。又用了盐造模，结果类似。
这表明FAM3D中和抗体有希望作为高血压干预治疗策略。
Conclusion
这是文章给出的总结：“细胞因子样蛋白FAM3D通过FPR1/2介导的氧化应激直接导致eNOS解偶联，从而加重内皮功能障碍和高血压。靶向内皮来源的FAM3D或给药FAM3D中和抗体恢复eNOS偶联，降低血压。因此，FAM3D可能是治疗高血压患者内皮功能障碍的一个有希望的靶点。”
本来应当读读discussion部分，但太晚了，橘猫需要睡觉了。
对FDM3D以及FDR1/2，非常需要再去详细了解，打算下一篇就读腹主动脉瘤那篇。在下一篇笔记里，会写到FDM3D-FDR1/2的详细介绍。
晚安喵
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